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二维制备液相

更新时间:2020-09-24

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简要描述:

制备液相的目的是对产品的单体进行提取和纯化。与传统的纯化方法(如蒸馏、萃取)比较,它是一种更有效的分离方法,因此被广泛应用在样品和产品的提取和纯化上。

制备液相的目的是对产品的单体进行提取和纯化。与传统的纯化方法(如蒸馏、萃取)比较,它是一种更有效的分离方法,因此被广泛应用在样品和产品的提取和纯化上。随着合成、植化、生化和制药等领域对高纯度组份的需求不断增加,制备型液相色谱仪应用的领域也在迅速的扩大发展。  
 

制备液相色谱仪的使用步骤  

一、开机  

1、接通电脑和仪器电源(接通电源之前可先把吸头拿到要使用的流动相瓶中);  

2、开仪器电源开关,一般先上后下,下为检测器开关;  

3、检查流动相是否够,仪器上记录的溶剂量时候正确;  

4、开电脑;  

5、打开仪器联机软件进入界面,点击启动设置泵流速为10,此时仪器中应该有液体流出;  

6、点击平衡然后点击每个波长和调整;  

冲一段时间,待压力稳定后可以进样。  

二、进样  

1、将进样器扭到load朝上,吸取一定量待分离液,  

快速注入,做过的是吸取0.2毫升;  

2、点击控制界面菜单栏中“运行控制”按钮—样品信息—设置信息存储路径(每次都要做);  

3、扭动进样器,使处于inload状态,保留时间开始计时;  

4、接峰;  

5、所有峰出来后,点击菜单栏中的中断—中断,准备重复进样。  

三、关机  

1、点击中断后冲几分钟,将流速设为0,待压力为0后将吸头转移到甲醇中,并把流速设为10;  

2、冲到已经没有东西被冲下为止,一般需要半个小时。一般此时压力早已稳定;  

3、将流速设为0,点击界面上的关闭(在启动旁边);  

4、关闭窗口,弹出的窗口都点肯定的,如确定是等。  
 

日常简易保养及维护  

1、流动相的抽滤要求:色谱纯试剂,二次蒸馏水,缓冲盐一定要过滤。  

2、制备型液相色谱仪吸滤头:特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗;清洗不成功则需要更换。  

3、单向阀:如遇到泵压不稳或流动相不能抽取,则可能是单向阀出现问题,卸下用异丙醇超声波清洗,清洗时须按其安装的反相放置在小烧杯中,切记不可与安装方向倒置超洗!  

4、泵头:泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修(如漏液,或更换柱塞杆及其密封垫等)。  

5、过滤片:当色谱峰出现异常情况时,有可能是此部件被污染,拆下用异丙醇超洗或更换制备型液相色谱仪过滤垫片  

6、排液阀:此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损,可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。  

7、手动进样器:平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗;如出现漏液现象,原因极可能为转子密封垫磨损或污染,一般须申请维修或更换制备型液相色谱仪配件。  

8、制备型液相色谱仪流通池:在色谱峰不正常时可能是此部件被污染可拆卸后取出其中的垫片用异丙醇超洗(可根据说明书进行操作或申请维修)。  

9、工作站:出现死机可重启计算机;不正常运行时,首先可更换电脑测试其硬件故障;或在本机上重新插拨接口、重新安装软件。  

进行分析时保留时间有时发生漂移,有时发生快速变化,有以下几点原因:  

1、温度控制不好,解决方法是采用恒温装置,保持柱温恒定。  

2、流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。  

3、柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡。  

4、流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定。  

5、泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出。  

6、流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。  
 

制备液相色谱主要用于以下领域:  

1.天然药物化学、中药化学。这是国内目前广泛的使用方法,为了弄清楚植物中的微量有效成分,开放手工色谱柱早已不够用了,几乎每个搞天然药化的实验室都至少有一台液相,土豪实验室人手一台液相。  

2.蛋白纯化。相对于前者,蛋白纯化的起步要稍微晚一点,但是发展很迅速。同时,由于外国仪器厂家在这个领域的优势不算太大,目前国内也在这个领域加快发展,抢占地盘。  

3.药物杂质纯化。由于合成工艺并不能做到100%的产率,往往伴有副产品,如何获得微量的杂质并确定结构和含量,这就得靠液相色谱。  

4.手性化合物的制备。这个主要是有机合成和方法学的在用。


 

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