制备液相色谱是将分离填料填装在色谱柱内,以液体流动相进行洗脱,利用药物不同活性成分与填料相互作用力的差异进行分离。在液相制备色谱分离中,一般将柱压力低于0.5MPa的称为低压制备色谱,压力0.5-2MPa的称为中压制备色谱,压力>2MPa的称为高压制备色谱。
对样品中的成分进行定性定量分析,同时可对复杂相中的各种成分,特别是微量成分进行分离。有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用,流出组分易收集等优点,被广泛应用到生物、食品、医药研究、环境等各种领域
制备液相色谱仪启动前的检查1、流动相的制备要与装置相适应
必须经过过滤:在送液泵内。为了防止杂质和颗粒进入流路,要装有0.45um的吸滤器,否则会导致流路污染。使仪器工作不正常。
(1)流动相恢复到室温后使用:流动相温度与室温相差时。容易产生气泡。导致仪器基线很难稳定:特别是发生漂移后。一定要使流动相恢复到室温后再使用。
(2)流动相务必进行脱气:使用制备液相色谱仪时遇到的麻烦就是流动相产生气泡。这会引起泵输液不畅和检测器产生噪声和漂移。
(3)检查溶剂瓶内吸滤器是否堵塞:溶剂的质量或微生物的生长会堵塞吸滤器。从而影响液相色谱系统的正常运行。
有效防止吸滤器堵塞的方法:①若需使用含盐的流动相,使用前一定要过滤;②流动相若为蒸馏水或含盐的缓冲液,建议现用现配;③尽量避免溶剂瓶在阳光下暴晒。
吸滤器堵塞后的处理方法:①取下吸滤器滤头,放在(1:4,v/v)硝酸溶液烧杯中超声清洗15min;②取出后用蒸馏水超声清洗10min;③用吸耳球吹出过滤头中的液体;④再换蒸馏水超声清洗10min;⑤用吸耳球吹出过滤头中的水分:将吸滤器滤头重新放入溶剂瓶中(正相系统注意将吸滤器滤头烘干再使用)。