液相色谱仪只要求样品能制成溶液,不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
液相色谱仪在条件:流动相、固定相、温度和压力等一定时,样品浓度很低时Cs、Cm很小时,K只取决于组分的性质,而与浓度无关。这只是理想状态下的色谱条件,在这种条件下,得到的色谱峰为正常峰;在许多情况下,随着浓度的增加,K减小,这时色谱峰为拖尾峰;而有时随着溶质浓度增加,K也增加,这时色谱峰为前延峰。因此,只有尽可能减少进样量,使组分在柱内浓度降低,K恒定时,才能获得正常峰。
而出现峰展宽的时候就要注意了,可能是以下原因:
1、流动相粘度过高
2、色谱柱污染或失效,柱效太低
3、进样体积过大
4、呈现两个或多个未被*分离的峰
5、保留时间过长
6、柱温过低
7、样品超载
8、保护柱污染或失效
9、柱外体积过大
10、缓冲液溶度太低
解决方法也很简单:
1、清洗或更换色谱柱
2、减小进样体积
3、等度洗脱时增加强溶剂浓度,或采用梯度洗脱
4、选择其他色谱柱改善分离效果
5、稀释样品,或采用小体积进样
6、检查各接头处的连接,避免死体积形成
7、增加浓度
8、适当提高柱温
9、更换保护柱
10、增加柱温,采用低粘度流动相