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蛋白层析柱的工作原理,我们有必要强调下

发布时间:2021-07-06   点击次数:128次
  蛋白层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外,直径加大,洗脱液体体积增大,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度,分离度与柱高的平方根相关,但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞,一般不超过1米。
  蛋白层析柱的工作原理
  1.预处理:在吸附树脂的生产过程中,一般采用的是工业级原料,产品没有经过进一步纯化处理,树脂内部残留少量单体,所以在使用之前,需用水溶性溶剂对其浸泡处理,然后用去离子水通过树脂层,置换出水溶性溶剂离子方可投入使用。
  2.逆流洗柱:用水洗出去水离子及破碎填料,树脂装入后,用蒸馏水反洗树脂层,直至出水清晰、无气味、无细碎树脂为止。再依次用酸碱等浸泡、冲洗树脂层,至出水呈中性为止。
  3.水洗:水洗的主要目的是除去层析柱上所附着的渣滓。
  4.吸附:吸附操作自上而下(或自下而上)通液,可采用不同流速,以选取*条件。流出液每隔一段时间取样检测,达泄漏点停止吸附,或多柱串联达饱和后解吸。吸附主要是吸取料液中的渣滓或要回收物,该过程应控制料液的速度及吸附量,大孔树脂应完全浸泡在料液里,以提高吸附效果和运行稳定性。
  5.解吸、再生:解吸操作自上而下(或自下而上)通解吸剂,单柱吸附时,解吸与吸附操作对流为佳。解吸剂沸点要低以便回收处理。
 
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