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蛋白层析柱工作中,要进行几个步骤呢

发布时间:2022-01-13   点击次数:442次
  蛋白质是生命活动的物质基础,也是生物体内的功能性大分子。随着分子生物学、结构生物学、生物制药行业等研究的不断深入,蛋白质纯化成为近年来越来越热的研究话题。
  蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段两个阶段。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如RNA、DNA等分开,常用的方法为硫酸铵沉淀法。精细纯化阶段的目的是把目的蛋白与其他大小及理化性质接近的蛋白区分开来,常用的方法有:凝胶过滤层析、离子交换层析、疏水层析、亲和层析等。
  蛋白层析柱的特点:
  1:耐压高,透明
  2:快速锁定的适配器确保均一的流速和小的死体积
  3:特定的装柱器保证好的柱效
  4:材质有很好的化学耐受性
  5:热稳定的夹套可维持一定的操作温度
  蛋白层析柱的工作流程:
  1.预处理:在吸附树脂的生产过程中,一般采用的是工业级原料,产品没有经过进一步纯化处理,树脂内部残留少量单体,所以在使用之前,需用水溶性溶剂对其浸泡处理,然后用去离子水通过树脂层,置换出水溶性溶剂离子方可投入使用。
  2.逆流洗柱:用水洗出去水离子及破碎填料,树脂装入后,用蒸馏水反洗树脂层,直至出水清晰、无气味、无细碎树脂为止。再依次用酸碱等浸泡、冲洗树脂层,至出水呈中性为止。
  3.水洗:水洗的主要目的是除去层析柱上所附着的渣滓。
  4.吸附:吸附操作自上而下(或自下而上)通液,可采用不同流速,以选取条件。流出液每隔一段时间取样检测,达泄漏点停止吸附,或多柱串联达饱和后解吸。吸附主要是吸取料液中的渣滓或要回收物,该过程应控制料液的速度及吸附量,大孔树脂应*浸泡在料液里,以提高吸附效果和运行稳定性。
  5.解吸、再生:解吸操作自上而下(或自下而上)通解吸剂,单柱吸附时,解吸与吸附操作对流为佳。解吸剂沸点要低以便回收处理。
  
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