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蛋白层析柱的长短有什么区别吗?

发布时间:2022-04-19   点击次数:83次
  蛋白层析柱的柱效测定是在纯化实验中非常重要的步骤,也是我们得到准确结果的保证。如果您是自己装柱,建议您在使用前先做柱效测定来确定柱子的效果。另外,当层析柱使用过一定次数,或者发生实验结果异常,柱子进入气泡,超压等问题,我们也可以对柱子进行柱效测定来判断柱效是否正常。
 
  即使用少量的样品流经装填好的层析柱中,通过仪器上的检测器检测实验过程,实验结束后对洗脱峰进行分析。凝胶层析用来分离大小不同的蛋白,分子量小的通过凝胶颗粒中的孔隙路径相对较长,分子量大的通过颗粒间隙路径相对短些。同样的时间,路径短的,流的快的就先出,从而达到分离的目的。
 
  简单的比喻,两人赛跑,一步之内很难分胜负,但是五十米,或者一百米就可以分出先后,所以柱子长短关乎分离效果。其它层析如离子交换层析(亲和层析)是靠跟配基结合能力强弱(特异性结合),来达到纯化作用,装柱的长短关系着柱载量,所以柱的长短由你的你的样品量来决定。
 
  为了得到纯度高、特异性好的抗大豆球蛋白多克隆抗体,用溴化氢活化的琼脂糖4B纯化经硫酸铵分级沉淀后的抗体,此免疫亲和层析过程节省时间且操作简单。经凝胶过滤层析的大豆球蛋白,溶胀后的填料与大豆球蛋白配基以共价键的形式连接,利用抗原抗体特异性结合的特点,杂蛋白随流动相流出,再利用洗脱液将抗大豆球蛋白的目标抗体特异性地洗脱下来,用紫外检测仪检测非特异性洗脱峰和特异性洗脱峰。
 
  通过鉴定,多抗血清中的其它蛋白组分被非特异性洗脱掉,经浓度测定,特异性洗脱的蛋白质量浓度为0.3mg/mL,间接ELISA显示,纯化后血清稀释128倍后显示为阳性。间接竞争ELISA测定抗体特异性结果显示抗体特异性得到提高。抗体被成功纯化,为加工破坏大豆球蛋白致敏性亚分子结构定位奠定基础,从而促进低致敏性食品的研发。
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