蛋白层析柱使用操作快速指南主要包括四个部分

　　缓冲液准备

　　1．冲洗缓冲液（0.1M磷酸钠，pH7.2）。要避免缓冲液中含NaCl。配好的缓冲液放置于4℃保存。

　　2．洗脱缓冲液（0.1M磷酸钠，0.1M氟化钠，pH7.2）。使用注射器时，洗脱缓冲液需保存在4℃。

　　3．清洗缓冲液（0.1M磷酸）。

　　4．保存缓冲液（0.02%叠n化钠，0.1M磷酸钠，pH7.2）。

　　蛋白层析柱的上样和冲洗

　　1．从柱子端部拿掉塞子，保存好这些塞子，备用。

　　2．用10倍柱体积冲洗缓冲液平衡柱子。因为保存缓冲液中含有0.02%的叠n化钠用来抑菌，为了去除叠n化物对离子的激发作用，这步预平衡是必须的。使针筒充满冲洗缓冲液，插入柱子并把所有缓冲液推入柱子。

　　3．预冷（4℃）的细胞裂解液上柱。使针筒充满裂解液，插入柱子并把所有裂解液推入柱子。对于1ml柱子，可以上5ml的裂解液。

　　4．用15倍柱体积冲洗缓冲液冲洗柱子。使冲洗缓冲液充满针筒，插入柱子并把所有的缓冲液推入柱子。这步可以根据纯化蛋白的需要增加额外的冲洗步骤。

　　洗脱

　　1．使针筒充满6倍柱体积的洗脱缓冲液，先把1.5倍柱体积的洗脱缓冲液上柱。收集1.5倍柱体积的流出液，每部分0.5倍柱体积，对其进行分析。在第二部分收集液中通常会含有一些纯化的蛋白。针筒也可以留在柱子上，用塞子塞住出口。

　　2．在室温下，用洗脱缓冲液孵育柱子至少30分钟。如果在4℃下孵育，则至少孵育12小时。

　　3倍柱体积洗脱缓冲液上柱。通常大量的蛋白会在前面五部分洗脱缓冲液中被洗脱出来。

　　清洗

　　1．用至少5倍柱体积的冲洗缓冲液冲洗柱子。

　　2．用3倍柱体积的清洗缓冲液清洗柱子。

　　3．用5倍柱体积冲洗缓冲液平衡柱子。

　　4．用2倍柱体积保存缓冲液平衡柱子；盖好柱子并保存于4℃。

　　以上便是今天关于蛋白层析柱使用操作快速指南主要包括四个部分的全部分享了，希望对大家今后使用本设备能有帮助。