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制备液相色谱中,某个状态出现异常可以这样子排除

发布时间:2022-03-07   点击次数:117次
  对制备液相色谱中的一些常用概念做一下介绍。
  (1)分析色谱的目的,是分析出混合物中一个(或者几个)纯物质的含量。制备色谱的目的,是从混合物中得到纯物质。为了加快分离的时间与提高分离的效率,制备色谱的的进样品量很大,导致制备色谱柱子的分离负荷的相应加大,也就必须加大色谱柱填料,增大制备色谱的直径和长度,使用的相对多的流动相。
  (2)样品的前处理:
  (3)制备色谱柱的材质及其特点
  (4)固定相的选择:
  (5)装柱方法的选择根据固定相颗粒度和柱子的尺寸,采用不同的装柱方法,往往装填越好分离效果越好。
  制备液相色谱中,有三个可以观察到的状态:柱压、检测器基线、谱图。通过观察和记录这三个状态可以监测仪器是否正常。若某个状态出现异常,故障排查和解决方案如下。
  1、柱压波动
  1)吸液管路进气泡①溶剂不足,吸滤头吸入空气,添加溶剂并排气泡。②吸滤头脏了或堵塞,用异丙醇(或5%稀硝酸)清洗。③溶剂中有气泡(尤其两种以上溶剂混合),超声(或抽滤)脱气。
  2)泵流量不稳①单向阀堵塞,大流速,若不能解决,则需拆下单向阀(异丙醇)超声清洗清洗或更换单向阀。②柱塞密封圈磨损,更换密封圈。③泵头污染,柱塞杆往复活动受阻,清洗泵头。
  3)柱床塌陷,维修或更换色谱柱。
  4)流动相混合后吸放热导致温度变化,以致柱压波动,如乙腈和水混合吸热,甲醇和水混合放热。若影响实验结果,则增加柱温箱或流动相预混。
  2、柱压升高或超压。逐段排查堵塞的位置:
  1)先拆下色谱柱,接上两通运行,若是色谱柱堵塞:①进样后样品析出,用合适的溶剂反冲色谱柱。②缓冲盐析出,用大比例水相的流动相冲洗色谱柱。③机械杂质堵塞筛板,异丙醇小流速反冲色谱柱。④色谱柱污染严重,需维修或充填。
  2)混合器堵塞,维修或更换。
  3)六通阀堵塞,将泵液管路接到连接色谱柱的阀口处,将阀扳至load状态,用易溶样品的溶剂小流速冲洗。4)压力传感器故障,维修或更换。
  3、检测器基线波动
  1)基线有规律波动,且幅度较大,则可能有气泡持续进入流通池。排查气泡来源并用异丙醇冲洗检测器或色谱柱。
  2)基线小幅度规律波动,可能是检测器灯能量不足(能量下降后,低波长下灵敏度先下降。
  3)基线漂移。①流动相在此检测波长下有吸收。更换流动相或改变波长。②色谱柱或检测池污染。以异丙醇冲洗色谱柱或检测池,或将检测池中透镜玻片取出清洗。
  4、谱图重现性差1)检查方法设置,包括流速、梯度、波长。
  2)检查流动相配置是否有误,A、B两相是否放反。
  3)检查柱压与之前是否有差异,若有变化,则前面1和2进行排查。
  4)进样前色谱柱是否完全平衡好。
  5)样品溶解方法。
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