制备液相色谱仪,是一款功能强大、兼容性高、效率高的模块化制备色谱系统。该仪器是在经典色谱的基础上,引用气相色谱理论,从技术上将流动相改为高压输送的。实验室使用的测试仪器很多,其中液相色谱就是其中之一。
制备液相色谱仪的柱越长,分离度越高,但柱压更高,分离所需时间更长;但分离度与理论塔板数的平方根成正比,所以一昧增加柱长并不是很有效的分离手段,一般情况下,150mm、5um的填料可以提供足够的塔板数。
流动相通过高压泵进入系统,样品溶液通过注射器进入流动相,流动相加载到色谱柱(固定相)中。由于样品溶液中各组分在两相中的分配系数不同,经过两相反复吸附-解吸分配后,各组分的运动速度有很大的不同。它被分离成一个单独的组件,然后依次从列中流出。当样品浓度通过检测器时,样品浓度被转换成电信号并传送给记录器,数据以地图的形式打印出来。
而对于粒径来说,它影响的则是色谱分离度,粒径越小,分离越快,柱效越高,但柱压力越高,柱容易被污染,导致柱寿命降低。常见分析柱通常使用5um填料,复杂的多组分样品分离一般使用3.5um粒径,更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径。
如果固定相选择是正确,但是分离度不够,那么选用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%;然而,3.5um的色谱柱的背压却是5um的2倍,因此如何选择填料粒径需要根据现实情况而定。