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蛋白层析柱装柱方法详解,你还为它而发愁吗

发布时间:2020-05-20   点击次数:136次
 蛋白层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,从而分离的一种层析法。  
 
蛋白层析柱装柱方法:
(1)装柱前要仔细看填料的使用说明书,每种填料都有自己的特性,以及特殊的装柱方法,针对不同的空柱,也要注意方法可能不同,这一点非常重要:装柱包括以后使用中绝对不允许柱内进入气泡(bubblefree),柱头事先也要排除气泡。  
(2)填料要加水搅拌成均匀悬液,悬液浓度依填料而不同,一般70-85%,迅速倒入空柱内,或吸或压,流速和具体步骤看说明书。  
(3)所有柱子尽量做到填料均匀,尤其是用于凝胶层析的柱子。装柱完成后,可用柱效测定的方法检查装填效果。一个装填合格的柱子的理论塔板高度应是填料平均粒径的2-4倍,在此范围内越小越好。  
(4)选择合适的泵,尽量流速满足要求,脉冲尽量小。选柱塞泵。  
(5)准备上柱的液体应进行过滤,至少是0.45micrometre。  
(6)关于纯化,首先要考虑的是你的目标:纯度、数量、速度、收率等等,再根据样品的具体情况,尤其是目标蛋白的性质,确定纯化策略。
(7)至于蛋白层析柱测序,大概不到1mg应该足够了。
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