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使用制备液相色谱仪的时候遇到故障不要怕,赶紧收藏本文

发布时间:2020-03-18   点击次数:148次
     制备液相色谱仪的使用步骤
  一、开机
  1、接通电脑和仪器电源(接通电源之前可先把吸头拿到要使用的流动相瓶中);
  2、开仪器电源开关,一般先上后下,下为检测器开关;
  3、检查流动相是否够,仪器上记录的溶剂量时候正确;
  4、开电脑;
  5、打开仪器联机软件进入界面,点击启动设置泵流速为10,此时仪器中应该有液体流出;
  6、点击平衡然后点击每个波长和调整;
  冲一段时间,待压力稳定后可以进样。
  二、进样
  1、将进样器扭到load朝上,吸取一定量待分离液,快速注入,做过的是吸取0.2毫升;
  2、点击控制界面菜单栏中“运行控制”按钮—样品信息—设置信息存储路径(每次都要做);
  3、扭动进样器,使处于inload状态,保留时间开始计时;
  4、接峰;
  5、所有峰出来后,点击菜单栏中的中断—中断,准备重复进样。
  三、关机
  1、点击中断后冲几分钟,将流速设为0,待压力为0后将吸头转移到甲醇中,并把流速设为10;
  2、冲到已经没有东西被冲下为止,一般需要半个小时。一般此时压力早已稳定;
  3、将流速设为0,点击界面上的关闭(在启动旁边);
  4、关闭窗口,弹出的窗口都点肯定的,如确定是等。
  制备液相色谱仪常见的故障
  1、气泡溢出
  流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入液相色谱流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0~3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。
  2、峰面积重复性不佳
  (1)进样阀漏液。
  (2)加样针不到位。
  (3)液量不足。处理对于*种情况更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态,以保证进样量的准确。日常工作中,液相色谱仪的保养非常重要,如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中,储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液,每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净,防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质,完全溶解,尽量减少对色谱柱的污染,以延长色谱柱的使用寿命,同时避免注射过浓的样品溶液,以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记,用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
  3、柱压高原因
  (1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内。
  (2)样品污染沉积。处理对于*种情况先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
  4、既无压力指示,又无液体流过
  (1)泵密封垫圈磨损。
  (2)大量气泡进入泵体。处理对于*种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
  5、压力波动大,流量不稳定
  原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
  6、出峰不佳,峰分叉
  (1)色谱柱被污染。
  (2)柱头填料塌陷。处理对于*种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。
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